БАЗИДИАЛЬНЫЕ ГРИБЫ

ЛЕЧЕБНЫЙ ГРИБ АГАРИК БРАЗИЛЬСКИЙ

Центр фунготерапии

ПРОТИВОРАКОВАЯ ГРИБНАЯ МЕТОДИКА «ПРОГМА»

Лечебный гриб Агарик бразильский

Изоляция противоангиогенного вещества из Агарик бразильский : его противоопухолевое и противометастатическое воздействие

Yoshiyuki Kimura,1 Tadashi Kido,3 Takeshi Takaku,2 Maho Sumiyoshi1 и Kimiye Baba3 1 Второе Отделение Клинической Биохимии, Медицинский Университет и 2 Единый Центр Наук, Отделение Shigenobu, Университет Ehime, Shigenobu-cho, Onsen-gun, Ehime 791-0295; and 3 Отделение Фармакогнозии, Университет Фармацевтических Наук Осака, Nasahara, Takatuski Сити, Осака 569-1094

(получено 10-ого июня 2004г./исправлено 26-ого июля 2004г./одобрено 27-ого июля 2004г.)

Лечебный гриб Агарик бразильский - облако меток. Признаки гриба Агарик бразильский. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Где достать гриб Агарик бразильский.

Ранее мы выявили, что провитамин Д2 (эргостерол), выделенный из Агарик бразильский, приостанавливает рост опухоли посредством торможения реваскуляризации, вызванной опухолью. В настоящем исследовании мы изолировали из гриба последующие противоангиогенные вещества (А-1 и А-2), используя систему анализа ангиогенеза, вызванного Matrigel и дополненного эндотелиальным фактором роста. А-1 был идентифицирован как пироглютамат натрия. Позднее мы исследовали противоопухолевое и противометастатическое воздействие А-1 на мышей, носителей карциномы легких Льюиса (КЛЛ). А-1 (30,100 и 300 мг/кг) тормозил рост опухоли и метастазирование легких. Путем орального приема А-1 (30,100 и 300 мг/кг) наблюдалось торможение уменьшения количества селезеночных лимфоцитов, Т клеток CD4+ и CD8+ у мышей, носителей КЛЛ. Далее, благодаря использованию А-1, мы наблюдали увеличение количества апоптических клеток опухолей, Т клеток CD8+, а также, природных клеток киллеров, распространившихся в опухоли. Наблюдалось притормаживание увеличения выражения фактора Willebrand (измерение ангиогенеза) в опухоли. Данные результаты позволили сделать вывод, что противоопухолевое и противометастатическое воздействие А-1 (пироглютамат натрия) может быть связано с подавлением сниженной иммунной реакции, вызванной ростом опухоли и реваскуляризации, вызванной опухолью. Это первый доклад, демонстрирующий, что пироглютамат натрия, изолированный из Агарик бразильский, как противоангиогенное вещество обладает сильнодействующим противоопухолевым и противометастатическим, а также иммуномодулирующим действием на мышей, носителей опухоли. (Cancer Sci 2004; 95: 758-764)

Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский?

В Бразилии базидиальный гриб Агарик бразильский (японское название: Himematsutake или Agarikusutake) традиционно использовался в качестве продукта лечебного питания для предотвращения рака, диабета, гиперлипидемии, артериосклероза и хронического гепатита. Официально подтверждено, что ежегодно в Японии производится от 200000 до 400000 кг сухого тела Агарик бразильский. 1, 2) Для предотвращения рака и/или в качестве вспомогательного средства совместно с химиотерапевтическими лекарствами после удаления злокачественной опухоли, Агарик бразильский используют от 300000 до 500000 людей. 1, 2) Обычно прописывают 3-5 граммов водного экстракта Агарик бразильский три раза в день. Горячий водный экстракт Агарик бразильский обладает сильным противоопухолевым воздействием на мышей, носителей саркомы 180. 3-6) Предполагается, что противоопухолевое воздействие свойственно ?- (1-6) глюкановой фракции. 3-6) Ранее мы исследовали противоопухолевое воздействие различных веществ, изолированных из липидной части Агарик бразильский и идентифицировали эргостерол как активное вещество. 7) Мы обнаружили, что эргостерол тормозил реваскуляризацию, вызванную опухолью. Далее, мы обнаружили, что ацетон - растворимые фракции экстрактов этанола тормозили рост опухоли и метастаз у мышей, носителей карциномы легких Льюиса (КЛЛ), а также ангиогенез, вызванный Matrigel (неопубликованные данные). В предварительном эксперименте, в ацетон - растворимых фракциях экстрактов этанола, мы обнаружили большое количество Д-маннитола. Тем не менее, in vivo (данные не указаны) Д-маннитол не оказывает эффекта на ангиогенез, вызванный Matrigel. Поэтому мы приготовили метанол - растворимую фракцию из хлороформ - метанола (1:1, в объемном отношении) для того, чтобы удалить Д-маннитол. После этого мы попытались изолировать противоангиогенные вещества из метанол- растворимой фракции, которые проявляли противоопухолевое и противоангиогенное воздействие. С помощью метода анализа ангиогенеза, вызванного Matrigel, мы изолировали два активных вещества (А-1 и А-2) из Агарик бразильский. Этот доклад ставит себе целью определить структуру А-1 и эффект, оказываемый А-1 на рост опухоли и метастаз легких у мышей, носителей КЛЛ. Кроме того, с целью прояснить механизм противоопухолевого и противоангиогенного воздействия А-1, мы исследовали эффект А-1 на селезеночную иммунную функцию, апоптоз опухоли и реваскуляризацию, вызванную опухолью.

Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!!

Вещества и методы

Общие экспериментальные процедуры

Спектр 1H-NMR (499.8 мегагерц) и 13C-NMR (125.68 герц) были зафиксированы в D2O с помощью спектрометра Varian Unity Inova 500 (Tosoh, Токио). Масс-спектры были измерены с помощью спектрометра Hitachi M-4000 H (Токио). Тонкослойная хроматография (ТСХ), предварительная ТСХ, обращённо-фазовая колоночная хроматография и предварительная обращённо-фазная хроматография (ОФХ (RP-HPLC)) были проведены с использованием силикагеля 60 F254, силикагеля 60 PF254, силан силикагеля 60 PF254 (Merck, Германия) и колонки Shimpak PREP-ODS (20 i.d. (внутренний диаметр) ?250 мм, Shimadzu, Kyoto, Япония) соответственно. Остальные химикаты были реагентами.

Природные вещества и изоляция противо-ангиогенных веществ из Агарик бразильский

Сушеные грибные тела Агарик бразильский были предоставлены компанией BHN Co. (Токио). Контрольные образцы находятся на хранении во Втором Отделении Клинической Биохимии, Медицинский Университет; Университете Ehime (Ehime, Япония). Сушеные грибные тела Агарик бразильский (1кг) были напрямую получены с использованием CHCl3-MeOH (1:1) (2 литра x 3) в течение 3 часов с последующим охлаждением. Экстракт был сгущен под пониженным давлением для получения темно-коричневого экстракта (250 г). Экстракт CHCl3-MeOH (72 г) был получен с MeOH (1 литр x 3 раза) и разделен на MeOH - растворимую фракцию (34.3 г) и MeOH - нерастворимую (37.7 г). Д-маннитол был изолировани из MeOH - нерастворимой фракции(37.7 г). MeOH - растворимая фракция (34.3 г) была успешно выделена с помощью CHCl3 и EtOAc для получения экстракта CHCl3 (6.86 г), экстракта EtOAc (0.16 г) и экстракта H2O (19.2 г), соответственно. Далее, эргостерол (163.2 мг) и бензойная кислота (55.0 мг) были изолированы из экстракта CHCl3 путем многоразового очищения с помощью силикагелевой колоночной хроматографии. MeOH -растворимая часть (60 г) была обработана с n-гексаном (1 литр x 3 раза) для получения n-гексан- растворимой (10.2 г) и n-гексан-нерастворимой фракций (46.1 г). H2O-растворимая фракция и n-гексан- нерастворимая фракция были соединены и противоангиогенные вещества были изолированы из этих фракций под руководством метода анализа ангиогенеза, вызванного Matrigel. H2O-растворимая плюс n-гексан- нерастворимая фракции (выход 65.3 г) были хроматографированы на обращённо-фазовой силан кремнегелевой колонне и элюированы с H2O - MeOH (7:3, в объемном отношении) для получения 20 фракций (М1-М30). Среди этих 20 фракций, фракции М5 и М6 тормозили ангиогенез, вызванный Matrigel. Фракции М5 и М6 (выход 5.54 г) были впоследствии разделены еще на четыре фракции (М5-1 - М5-4) с помощью предварительной обращённо-фазной хроматографии (RP-HPLC)(Shimpack, PREP-ODS, элюат: H2O - MeOH (5:1, в объемном отношении); скорость потока: 6 мл/мин). М5-1 и М5-2 тормозили ангиогенез, вызванный Matrigel. М5-1 и М5-2 (выработка 2.52 г), у которых была нингидрин - положительная реакция, были очищены подготовительной ТСХ (силикагель 60 PF 254, движение растворителя: H2O - MeOH (1:100, в объемном отношении) для получения пяти веществ, включая А-1 (выход 293.7 мг) и А-2 (123.0 мг). Среди этих пяти веществ три были идентифицированы как аланин, пролин и гамма- аминомасляная кислота путем прямого сравнения с аутентичными образцами. Эти три вещества (аланин, пролин и гамма аминомасляная кислота) не оказывали воздействие на ангиогенез, вызванный Matrigel, в то время как А-1 и А-2 тормозили его.

Материалы

Матрица базальной мембраны "Matrigel" (без фактора роста, растворимый экстракт базальной мембраны опухоли Engelbreth- Holm-Swarm (EHS)) была приобретена у Becton Dickinson Labware (Бедфорд, Массачусетс). Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) был приобретен у Nissui Pharmaceutical Co. (Токио) и использовался в качестве среды культивирования. Антибиотические и антигрибковые растворы (100x), содержащие 10000 ед/мл пенициллина, 10мг/мл стрептомицина и 25 µг/мл амфотерицина в 0.9% NaCl, были приобретены у Sigma Co. (St. Louis, Миссури). Фетальная бычья сыворотка (ФБС) была приобретена у GIBCO BRL (Окленд, Новая Зеландия). Сосудистый эндотелиальный фактор роста и гепарин были приобретены у Wako Pure Chemical Co. (Осака, Япония). Средство разделения лимфоцитов мышей (Lympholytes-Mouse) было приобретено у Dainippon Pharmacy Co. (Осака, Япония). Флюоресцеин изотиоцианат (FITC) - меченые противо-мышиные антитела CD4 и CD8, фикоэритрин (ФЕ(FE)) - меченое противо-мышиное природное антитело-киллер (ПК), флюоресцеин изотиоцианат - меченый противо -мышиный IgG2a и ФЕ - меченый противо-мышиный IgG2a были приобретены у Serotec (Оксфорд, Англия). Кроличье поликлональное антитело GM1, мышечный моноклональное противо-человеческое CD8 антитело (D-9) и были приобретены у Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Санта Круз, Калифорния) и DAKO Cytomation (Киото, Япония) соответственно. Набор для определения апоптоза apoptosis in situ был приобретен у Wako Pure Chemical Co.

Клетки

Признаки гриба Агарик бразильский. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский? Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Где достать гриб Агарик бразильский. А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!!

Лекарственно-устойчивые клеточные линии мышей, носителей КЛЛ с большим количеством метастаз, были приобретены в банке генов Riken (Tsukuba, Япония) и содержались в среде культивирования DMEM, в которую была добавлена 10% ФБС , пенициллин (100ед/мл), стрептомицин (10µг/мл) и амфотерицин В (0.25µг/мл).

Животные

Мыши C57BL/6J женского пола (в возрасте 5 недель) были приобретены у Clea Japan Co (Осака, Япония) и содержались в течении 1 недели в комнате с контролируемой температурой и влажностью. До эксперимента они имели свободный доступ к еде и воде. С мышами обращались согласно этическим принципами Мышиного Центра, Медицинского Университета, Университета Ehime. Комитет по Исследованиям на Животных Университета Ehime одобрил протокол эксперимента.

Измерение реваскуляризации, вызванной Matrigel.

Реваскуляризация, вызванная Matrigel, была проанализирована с помощью модификации метода Passaniti et al.8) Вкратце, каждой из мышей C57BL/6J женского пола подкожно была введена инъекция 0.5 мл Matrigel, содержащего 20 нг/мл сосудистого эндотелиального фактора роста и 32 ед/мл гепарина в присутствии или отсутствии указанного количества различных фракций или веществ, изолированных из Агарик бразильский. Мыши были умерщвлены, а гели извлечены и взвешены, количество гемоглобина в гелях было определено с помощью Hemoglobin kit (Wako Pure Chemical Co.).

Измерение роста опухоли или легочных метастазов у мышей, носителей КЛЛ

КЛЛ (3?105 клеток, 0.5 мл) была приготовлена путем трансплантации в спину или внутривенной инъекции мышам C57BL/6J женского пола в нулевой день. Метанол -растворимая фракция (300 или 900 мг на кг массы тела) экстракта CHCl3-MeOH или вещество А-1 (30,100 и 300 мг на кг), изолированное из Агарик бразильский, принималось орально ежедневно (0700 ч) на протяжении 30 или 14 дней, начиная через 12 часов после имплантации клеток КЛЛ. Метанол-растворимая фракция и А-1 были растворены в дистиллированной воде. Здоровые мыши и мыши, носители КЛЛ, не проходящие лечение, (контрольная группа) принимали дистиллированную воду по тому же графику. Содержание А-1 составляло от 10 до 20% в горячем водном экстракте Агарик бразильский. Людям горячий экстракт Агарик бразильский обычно прописывается в дозировке от 3 до 5 грамм три раза в день. По этой причине в исследовании использовались дозировки 30,100 и 300 мг/кг. Объем опухоли измерялся каждые 2-3 дня посредством прямого измерения циркулем. Он рассчитывался как длина*ширину2/ 2. На 31 или 15 день мыши были умерщвлены путем цервикального смещения, а их селезенки, зобные железы и легкие были изъяты и взвешены. Метастазы в легких были подсчитаны с помощью стереомикроскопа. Все опухоли и метастатические легочные ткани были выдержаны в 10% буферном формалине, по меньшей мере, в течение 24 часов.

Иммуногистохимическое исследование опухоли

Ткани опухоли, выдержанные в 10% буферном формалине были постепенно обезвожены в растворах, содержащих повышенное процентное содержание этанола (70, 80, 95 и 100%), очищены в Histoclear (FUME HOOD, AS-ONE, Токио, Япония), залиты парафином под вакуумом, поделены на кусочки толщиной 5мм, депарафинированы и пропитаны гематоксилином и эозином. Количество апоптических клеток в депарафинированных частях опухоли было определено с помощью метода in situ nick-end labeling (TUNEL), с использованием набора для определения Apoptosis in situ Detection kit. Рост эндотелия (реваскуляризация, вызванная опухолью) и инвазия Т-клеток CD8?? и природных клеток-киллеров в опухолях были также определены с помощью техники иммунопероксидазы, с использованием не свойственных человеку антител vWF для обнаружения сосудистых эндотелиальных клеток, антител анти- CD8?? и антител анти- асиало GM1 для обнаружения природных клеток-киллеров. Было сфотографировано четыре различных микроскопических поля (усиление x100 или x 400) на тарелке, были подсчитаны TUNEL-положительные апоптические клетки, CD8- и ПКК -положительные клетки в опухолях.

Структура А-1

А-1 - это бесцветное густое вещество с положительной -нингидрин реакцией. Обработка А-1 50% HCl дала L- глютаминовую кислоту. FAB-MS (m/z): 128.0379 (M?-1) C5H7O3N. 1H-NMR (в D2O, ??ppm): 2.08 (1H, dddd, J=12.9, 8.9, 7.1 и 5.7 герц), 2.39 (1H, ddd, J=17.4, 9.3 и 7.1 герц), 2.43 (1H, ddd, J=17.4, 8.9 и 6.7 герц), 2.53 (1H, dddd, J=12.9, 9.3, 9.2 и 6.7 герц), 4.24 (1H, dd, J=5.7 и 9.2 герц). 13C-NMR (в D2O, ??ppm): 184.35 (-C?O-), 181.90 (-COO-), 60.28 (-CH-), 27.64 (-O=C-CH2-), 26.72 (-CH2-H2-).

Статистический анализ

Все величины выражены ±SE. Данные были проанализированы при помощи одностороннего анализа вариантов, впоследствии различия между величинами были проанализированы с помощью Fisher's protected LSD multiple- comparison test (теста множественного сравнения). Различия считались значительными при P <0.05.

Результаты

Воздействие метанол-растворимой фракции, приготовленной из хлороформ-метанолового (1:1) экстракта Агарик бразильский на вес опухоли и метастазирование легких у мышей, носителей КЛЛ.

Как видно из таблицы 1, по сравнению с весом опухолей у мышей, носителей КЛЛ, не проходящих курс лечения (контрольные группы), у мышей, носителей КЛЛ и проходящих курс лечения, конечный вес опухоли значительно уменьшился после орального приема метанол-растворимой фракции (300 или 900 мг/кг) в течение 30 дней подряд. Данная фракция была приготовлена из экстракта хлороформ-метанола (1:1). Более того, благодаря оральному приему метанол-растворимой фракции, притормозилось образование опухолевых метастаз в легких.

Воздействие активных веществ (А-1 и А-2), оказываемое на ангиогенез, вызванный Matrigel

Гели, сформировавшиеся после подкожной имплантации Matrigel, были легко отличимы от окружающих тканей и оказывали небольшую местную или ангиогенную реакцию (рис. 1). Гели, произведенные из Matrigel, в которые было добавлено 20 нг/мл сосудистого эндотелиального фактора роста и 32 ед/мл гепарина, вызывали ангиогенную реакцию (рис. 1). Использование смеси Matrigel/ сосудистый эндотелиальный фактор роста /гепарин значительно увеличивало вес геля и концентрацию в нем гемоглобина в сравнении с тем, когда Matrigel вводился самостоятельно на 6 день после имплантации. Метанол-растворимая фракция (800µг/мл), приготовленная из хлороформ-метаноло-растворимой фракции, значительно тормозила ангиогенез, вызванный смесью Matrigel/сосудистый эндотелиальный фактор роста /гепарин (таблица 2). Более того, изоляция активных компонентов из фракций М5 плюс М6 была проведена под руководством анализа Matrigel -имплантированного ангиогенеза, описанного в "Веществах и Методах", а четыре фракции (М5-1 - М5-4), обладающие противоангиогенным воздействием были получены из фракций М5 плюс М6 с помощью предварительной обращённо-фазной хроматографии, как описано в "Веществах и Методах". Среди этих четырех фракций, М5-1 и М5-2 тормозили ангиогенез, вызванный смесью Matrigel /сосудистый эндотелиальный фактор роста /гепарин (таблица 3). А-1 и А-2 были изолированы как противоангиогенные вещества из фракций М5-1 и М5-2 путем повторяющейся ТСХ, описанного в "Веществах и Методах" (таблица 3). А-1 в дозировке 400 или 800 µг/мл тормозил ангиогенез, вызванный Matrigel, пополненным сосудистым эндотелиальным фактором роста и гепарином.

Структура активных веществ(а) (А1 и А2).

А-1 и А-2, обладающие противоангиогенным воздействием, были изолированы из метанол-растворимой фракции экстракта хлороформ-метанола (1:1). А-1 - это густое вещество, дающее положительную нингидрин реакцию. Обработка А-1 50% HCl давала L- глютаминовую кислоту. Основываясь на анализе спектра FAB-MS, молекулярная формула А-1 - C5H7O3N (M?-1, 128.0379). Спектр 1H-NMR (в D2O, ??ppm) А-1 показывал протонные, соответствующие метиленовым группам при 2.08 (1H, dddd, J=12.9, 8.9, 7.1 и 5.7 герц) и 2.53 (1H, dddd, J=12.9, 9.3, 9.2 и 6.7 герц) при позиции C-4, и 2.39 (1H, ddd, J=17.4, 9.3 и 7.1 герц) и 2.43 (1H, ddd, J=17.4, 8.9 и 6.7 герц) при позиции C-3, и сигнал, соответствующий метиной группе при 4.24 (1H, dd, J=5.2 и 9.7 герц) при позиции C-5. Спектр 13C-NMR (в D2O, ??ppm) А-1 показывал углеродные сигналы в результате карбонильных групп при 181.90 и 184.35, сигнал в результате метин группы при 60.28 и сигналы в результате метилен групп при 26.72 и 27.64. Несмотря на то, что эти данные по А-1 схожи с данными по L-пироглютамату, химические сдвиги у А-1 отличался от химических сдвигов у L-пироглютамата. Поэтому можно предположить, что А-1 - это соль натрия или калия пироглютамата. Атомно-абсорбционный анализ А-1 выявил наличие натрия, но другие металлы не были обнаружены. Поэтому, основываясь на атомно-абсорбционный анализе А-1, был сделан вывод, что А-1 - это натриевый пироглютамат. Структура А-2 все еще исследуется.

Воздействие А-1, выделенного из Агарик бразильский, на рост опухоли и метастазирование легких у мышей, носителей КЛЛ.

По сравнению с объемом опухоли у мышей, носителей КЛЛ, не проходивших курс лечения (контрольная группа), объем опухоли у мышей, носителей КЛЛ, проходивших курс лечения, значительно уменьшился вследствие орального приема А-1 (30,100 и 300 мг/кг) в течение 30 дней подряд (рис. 2). Более того, конечный вес опухоли и образование опухолевых метастаз в легких также тормозились благодаря оральному приему А-1 в дозировке 30,100 и 300 мг/кг (таблица 4). Между тремя дозировками А-1 (30,100 и 300 мг/кг) не было значительной разницы. Для исследования противоопухолевого и противометастатического воздействия более маленьких дозировок А-1 необходимы дальнейшие исследования. Количество эритроцитов (506.3±78.4?104 клетки/µл, n=8) и концентрация гемоглобина (7.80±1.25 г/100 мл, n=8) у мышей, носителей КЛЛ, были значительно (P=0.010 и P=0.012 соответственно) ниже (799.0±7.4?104 эритроцитов/µл и 12.4±0.09 г гемоглобин/100мл), чем у здоровых мышей. Как видно из таблицы 5, оральный прием А-1 (30,100 и 300 мг/кг) значительно тормозил сокращение количества эритроцитов и концентрации гемоглобина у мышей, носителей КЛЛ, не проходивших курс лечения (контрольные группы). С другой стороны, не наблюдалось значительных различий в количестве лейкоцитов у здоровых мышей и у мышей, носителей КЛЛ, проходивших и не проходивших курс лечения А-1.

Воздействие А-1 на селезеночные CD4??и CD8?? Т-клетки и клетки природные киллеры у мышей, носителей КЛЛ.

Количество лимфоцитов в селезенках у мышей, носителей КЛЛ, сократилось до 1.39±0.165?107 клеток с 3.50±0.45?107 клеток у здоровых мышей. Количество селезеночных CD4 и CD8?? Т-клеток у мышей, носителей КЛЛ, также сократилось до 2.21±0.356?106 клеток (мыши контрольной группы), от 6.50±0.897?106 клеток (здоровые мыши) CD4?? Т-клеток и от 4.54±0.719?106 клеток (контрольная группа) до 7.77±1.19?106 клеток (здоровые мыши) CD8?? Т-клеток. Не наблюдалось значительной разницы между количеством селезеночных природных клеток-киллеров у здоровых мышей и мышей контрольной группы. Как видно из таблицы 6, уменьшение селезеночных лимфоцитов у мышей, носителей КЛЛ значительно тормозилось оральным приемом А-1 в дозировке 30,100 и 300 мг/кг. Уменьшение количества CD4?? и CD8?? Т-клеток у мышей, носителей КЛЛ, также тормозилось оральным приемом А-1 в дозировке 30 и/или 300 мг/кг. При оральном приеме А-1 в дозировке 100 мг/кг наблюдалась тенденция торможения (P=0.0596)сокращения CD4?? Т-клеток. При оральном приеме А-1 в дозировке 30 мг/кг количество клеток природных киллеров увеличилось в сравнении со здоровыми мышами и мышами, носителями КЛЛ, не проходившими курс лечения (таблица 6).

Воздействие А-1 на иммуногистохимию опухолей у мышей, которым была подкожно имплантирована КЛЛ.

На 31 день А-1 (30,100 и 300 мг/кг) увеличивал количество апоптичных клеток в опухолях у мышей, которым была подкожно имплантирована КЛЛ (рис. 3а и таблица 7). У мышей, носителей КЛЛ, не проходивших курс лечения, выражение vWF в опухолях увеличилось (рис. 3bи таблица 7). Эти данные демонстрируют, что реваскуляризация стимулировалась вместе с ростом опухоли. Ангиогенез в опухолях тормозился посредством орального приема А-1 (30,100 и 300 мг/кг) (рис. 3b и таблица 7). CD8?? Т- клетки заполонили центральную часть опухолей после орального прием А-1 (30,100 и 300 мг/кг). Природные клетки-киллеры также заполонили центральную часть опухолей после орального прием А-1 (30,100 и 300 мг/кг) (рис. 3,c и d, таблица 7).

Воздействие А-1 на образование метастаз в легких у мышей, которым была внутривенно введена КЛЛ.

Как видно из рисунка 4, А-1 (30,100 и 300 мг/кг) значительно тормозил количество опухолевых колоний, метастазирующих в легкие по сравнению с мышами, которым была внутривенно введена КЛЛ, не проходивших курс лечения.

Вывод

В нашем предыдущем исследовании мы изолировали эргостерол от липидной фракции Agaricus Blazеi, как противоопухолевого вещества, и получили доказательство, что механизм его противоопухолевого воздействия может затрагивать торможение ангиогинеза, вызванного опухолью. Более того, мы предположили, что вещество(ва) с небольшим молекулярным весом в метанол- или водно-растворимой фракции могут обладать противоангиогенным воздействием. В настоящем исследовании мы изолировали два активных вещества (А-1 и А-2) из метанол-растворимой фракции Агарик бразильский как противоангеогенные вещества под руководством метода анализа ангиогенеза, вызванного Matrigel. Основываясь на анализе 1H- и 13C-NMR, FAB-MS и атомной абсорбции было определено, что А-1 - это натриевый пироглютамат. Механизм противоангиогенного воздействия А-1 еще должен быть исследован. Возможно, он заключается в тормозящем эффекте производства СЕФР в КЛЛ клетках и присоединения СЕФР к сосудистым эндотелиальным клеткам. Следующим шагом было изучение противоопухолевого противометастатического воздействия изолированного А-1 для прояснения затронутых механизмов. А-1 не влияет на синтез ДНК в клетках КЛЛ или на пупочные венные эндотелиальные клетки (HUVECs ) (данные не продемонстрированы). Солидные опухоли вызывают реваскуляризацию и получающийся в результате ангиогенез стимулирует рост опухоли и метастаз. 9-13) В нашем исследовании in vivo мы показали противоопухолевое и противометастатическое воздействие А-1 на мышей, носителей КЛЛ, и его воздействие, тормозящее снижение иммунных функций (сокращение количества селезеночных лимфоцитов, CD4?? и CD8?? Т-клеток) на мышей, носителей КЛЛ. Кроме того, А-1 увеличил количество природных клеток-киллеров у мышей, носителей КЛЛ. Иммуногистохимия опухолей после орального применения А-1 выявила, что А-1 увеличил апоптоз клеток опухоли и инвазию CD8?? Т-клеток и природных клеток-киллеров в центральную область опухолей. Более того, мы подтвердили, что А-1 тормозил выражение vWF в опухолях (реваскуляризация, вызванная опухолью). Таким образом, у мышей, носителей опухоли, было обнаружено, что А-1 (натриевый пироглютамат) стимулировал специфические иммунные функции в селезенке и опухолях. Было продемонстрировано, что природные клетки-киллеры являются посредником для сильного противоопухолевого и противометастатического воздействия. 14-16). Было выявлено, что и CD4??, и CD8?? Т- клетки необходимы для побуждения регрессии опухоли и развития защитных функций организма. 17-20). Недавно было объявлено, что интерлейкин (ИЛ)-21 оказывает сильный противоопухолевый эффект посредством активации природных клеток-киллеров и Т-клеток 21). Исходя из полученных результатов можно предположить, что механизм противоопухолевого и противометастатического воздействия А-1 (натриевый пироглютамат) может быть связан с подавлением снижения иммунной реакции, вызванного ростом опухоли и ангиогенезом, вызванным опухолью. Это первый доклад, демонстрирующий, что натриевый пироглютамат (А-1), изолированный из Агарик бразильский, обладает противоопухолевым и противометастатическим воздействием, явившимся результатом противоангиогенного воздействия и модулирования иммунной системы у мышей, носителей опухоли.

Лечебный гриб Агарик бразильский - облако меток. Признаки гриба Агарик бразильский. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Где достать гриб Агарик бразильский.

Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский?

Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!!

Признаки гриба Агарик бразильский. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский? Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Где достать гриб Агарик бразильский. А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!!

ФитоДоктор
Телефон: (495) 502-59-49, (495) 506-32-64
E-mail: phytodoctor@mail.ru

Лечебный гриб Агарик бразильский - облако меток. Признаки гриба Агарик бразильский. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Где достать гриб Агарик бразильский. Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский? Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!! Признаки гриба Агарик бразильский. Где растет Агарик бразильский, как растет Агарик бразильский, какая польза от гриба Агарика бразильского, где достать гриб Агарик бразильский? Питание грибом Агариком бразильским, действие гриба Агарика бразильского на человека. Причины гриба Агарик бразильский. Лечебный гриб Агарик бразильский. Прогноз гриба Агарик бразильский. Симптомы гриба Агарик бразильский. Профилактика гриба Агарика бразильского. Питание грибом Агариком бразильским. Какой классный гриб - Агарик бразильский. Ну всем он, Агарик бразильский, хорош. И растет Агарик бразильский где надо, и польза от Агарика бразильского какая надо, и достать Агарик бразильский не сложно. Действие гриба Агарика бразильского на человека. Где растет Агарик бразильский? А какая профилактика от Агарика бразильского, а какие симптомы от Агарика бразильского, а какие признаки Агарика бразильского. О, Агарик бразильский!!! Пою тебе оду - Агарик бразильский! Прогноз гриба Агарика бразильского, симптомы гриба Агарика бразильского, профилактика гриба Агарика бразильского. Как растет Агарик бразильский. Какая польза от гриба Агарика бразильского. Признаки гриба Агарика бразильского, причины гриба Агарика бразильского, лечебный гриб Агарик бразильский. Где достать гриб Агарик бразильский. А питание Агариком бразильским, а прогнозы Агариком бразильским. Только Агарик бразильский и только он, Агарик бразильский может помочь мне! Я хочу тебя - Агарик бразильский, как никто никогда не хотел Агарика бразильского, как я хочу - это чудо - Агарик бразильский!!!

Яндекс.Метрика
Хостинг от uCoz